Engineered reverse transcriptases allowed the synthesis of cDNA
from very low amounts of RNA. Mutations are inserted into the
RNase H domain of the MuLV‘s reverse transcriptase. Therefore,
by reducing the degradation of the RNA during the first-strand
synthesis, a higher yield of full-length cDNA is obtained.
Additionally, a higher thermal stability increases the robustness
of the enzyme. The FastGene® Scriptase II is exactly one of those engineered enzymes. With its mutation in the RNase H domain
and higher thermal stability, it is the optimal choice for more complex applications, such as RT-qPCR and NGS

Applications

• Quantification of Gene Expression
• RT-qPCR
• Next Generation Sequencing
• Low RNA concentration
• Difficult templates
•  

Lower RNase H activity for longer cDNA

The FastGene® Scriptase II has a modified RNase H domain. The RNA is therefore not degraded and serves as a template for longer cDNAs, resulting in fragment size of up to 12 kBp.

 

Engineered enzymes – optimized for qPCR

The FastGene® Scriptase II delivers superior cDNA templates for downstream applications, e.g. qPCR and NGS. The resulting full-length cDNA gives a complete picture of the gene and is able to show modification, e.g. splicing variants.

 

Comparison of different PCR results

Multiplex PCR

 

Bild 1: Vergleich der cDNA einer Multiplex PCR. Die cDNA wurde zum einen mit der FastGene® Scriptase II und zum anderen mit der RT SS-II eines Mitbewerbers (Competitor I) jeweils bei 42 °C und 50 °C synthetisiert.

qPCR

 

Bild 1: Vergleich von qPCR Ergebnissen. Verwendet wurden Primer für GAPDH und cDNA, die von der FastGene® Scriptaste II und einer Reversen Transkriptase eines Mitbewerbers (Competitor I) bei 42 °C synthetisiert wurde. Zur cNDA-Synthese wurden unterschiedliche RNA Anfangskonzentrationen eingesetzt.

 

Bild 3: Vergleich von qPCR Ergebnissen. Verwendet wurden Primer für YWHAZ und cDNA, die von der FastGene® Scriptaste II und einer Reversen Transkriptase eines Mitbewerbers (Competitor I) bei 42 °C synthetisiert wurde. Zur cNDA-Synthese wurden unterschiedliche RNA Anfangskonzentrationen eingesetzt.

 

Cat. No.	Product	Content
LS53	FastGene® Scriptase II (20.000 units at 200 U/μl)	100 Reactions
LS63	FastGene® Scriptase II cDNA Synthesis containing Oligo dTs, random hexamer and RNase inhibitor	100 Reactions